浅谈高效液相色谱用的超纯水

高效液相色谱(HPLC)是一种进行物质分离、鉴定和定量的分析方法。与其它通常采用梯度模式的各种生物聚合物HPLC(离子交换、疏水相互作用和反相色谱)不同，SEC(尺寸排阻色谱法)通常采用等度方法。纯水处理设备生产厂家

尺寸排阻色谱法

尺寸排阻色谱法(SEC)包括凝胶渗透色谱法(GPC)和凝胶过滤色谱法(在含水条件下实行的一种特殊SEC法)，是利用球形颗粒多孔基质作为固定相的一种分析方法。小分子能够渗透到筛孔中并被截留。与此相反，大分子则不能进入筛孔，只能以线性流速通过色谱柱。因此，分子根据其大小进行分离，大分子先从色谱柱中洗脱出来，而后才是小分子从色谱柱中洗脱出来。反渗透纯水设备

SEC是一种常用于生物聚合物的分离方法。目前的应用领域如下：

测定分子量，例如抗体免疫球蛋白G。

作为一个研究构象变化的工具用于下游加工(后续加工和产品净化)。

特殊应用：用于肽和蛋白质混合物的自动化样品制备的SEC限制介入色谱柱。

几十年来，生物制药在医药市场上已经占据了重要地位。在这些生物制药产品中，有医药用酶、凝血因子、各种激素——如胰岛素、依泊汀或生长激素、单克隆抗体(mAbs)和生物工程疫苗。

SEC分析是下游加工中的标准方法，用于通过重组生产治疗性蛋白质和抗体来确定生物制造期间靶分子的纯度和聚集状态。

确定分子量间的差异来检测污染物和聚合物是基于高纯洗脱液的使用，高纯洗脱液不会与固相发生任何反应。

SEC所需特殊质量的水可以从各个制造商处购买，或者直接使用艾柯实验室纯化水系统在现场按需直接制备。

水的实验评估

本文对重组单克隆抗体进行了定性研究，作为SEC分析使用的一个例子。所使用的解决方案源于我们的内部方案。

在上游加工(溶液制备)期间，发酵培养基(宿主细胞DNA、宿主细胞蛋白质、培养基成分，如白蛋白、胰岛素和转铁蛋白)以及微生物和内毒素产生的杂质和污染物必须在下游加工中减少。这一过程也是杂质的来源(蛋白酶的加入，蛋白A的泄漏)。mAb产物本身也能形成杂质，例如分裂的或聚集的抗体，mAb的脱酰胺或氧化形式或错误折叠分子，对此必须进行检测。

对于靶蛋白纯度的质量控制，根据其分子量分离，采用SEC等方法来检测聚集的抗体。